实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞

一、实验目的：

1、学会如何使用显微镜观察细胞；

2、了解细胞的结构；

3、学会制作临时装片。

二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片

三、实验用具： 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）

四、方法步骤：

1、制作松针的临时切片：

（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。

（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。

2、观察切片：

（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。

（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。

（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。

（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。

3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）

4、 动物神经细胞永久装片的观察。

五、考点提示：

1、松针的叶面结构是什么样的？

2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？

3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？

4、如何调节焦距？

5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

一、实验目的：

尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。

二、实验原理：

某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。

1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。

可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：

葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加热 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O

即Cu 2+被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀

淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。

2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。

脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。

在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。

脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。

脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。

3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）

三、实验材料：

1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。

2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。

3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。

4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。

四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜

五、实验试剂：

1．斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）

2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液

3．双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）

4．体积分数为50%的酒精溶液

5．碘液

6．蒸馏水

六、方法步骤：

一、可溶性糖的鉴定

操 作 方 法

注 意 问 题

解 释

1. 制备组织样液。

（去皮、切块、研磨、过滤）

苹果或梨组织液必须临时制备。

因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。

应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；

切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。

斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水；

甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu OH生成。

4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀）

最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。

也可用酒精灯对试管直接加热。

防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；

缩短实验时间。

二、脂肪的鉴定

操 作 方 法

注 意 问 题

解 释

花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。

干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。

因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。

在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。

染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。

酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。

用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。

装片不宜久放。

时间一长，油滴会溶解在乙醇中。

三、蛋白质的鉴定

操 作 方 法

注 意 问 题

解 释

制备组织样液。

（浸泡、去皮研磨、过滤。）

黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。

鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。

A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。

CuSO4溶液不能多加。

先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。

否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。

可用蛋清代替豆浆。

蛋清要先稀释。

如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。

附：淀粉的检测和观察

用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。

碘液不要滴太多

以免影响颜色观察

七、考点提示：

1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ 答：葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

2、还原性糖植物组织取材条件？ 答：含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

3、研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 答：加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 答：混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。

5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 答：浅蓝色棕色 砖红色。

6、花生种子切片为何要薄？ 答：只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

7、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 答：切片的厚薄不均匀。

8、脂肪鉴定中乙醇作用？ 答：洗去浮色。

9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？ 答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三：观察DNA和RNA在细胞中的分布

一、实验原理：

1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。

2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

3、盐酸的作用

① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；

② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合

二、实验材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞

三、实验用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、

石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜

四、方法步骤：

1、取材

① 滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；

② 刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；

③ 涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；

④ 烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。

2、水解

① 解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；

② 保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。

3、冲洗涂片

① 冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；

② 吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。

4、染色

① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；

② 吸：吸去多余染色剂；

③ 盖：盖上盖玻片。

5、观察

① 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；

② 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。

五、考点提示：

1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；

2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；

3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；

4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；

5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。